ПЦР-диагностика COVID-19 проводится с использованием метода обратной транскрипции-полимеразной цепной реакции (RT-PCR), позволяющего обнаружить генетический материал вируса SARS-CoV-2 даже в очень низких концентрациях.
Этапы проведения ПЦР-теста на ковид
Процесс начинается с получения образца, который может быть взят из носоглотки или ротоглотки с помощью специального тампонного тампона. Иногда используют также образцы мокроты или слюны. Забор материала проводится с соблюдением мер безопасности для предотвращения риска заражения персонала и для получения качественного образца.
После получения образца начинается этап выделения вирусной РНК. Он проводится с использованием специализированных наборов для экстракции, которые позволяют отделить РНК вируса от других компонентов клеток и биологических жидкостей. Далее выделенная РНК подвергается процессу обратной транскрипции, при котором с её помощью синтезируется комплементарная ДНК (кДНК). На этом этапе используются обратные транскриптазы – ферменты, способные преобразовывать РНК в ДНК.
Следующим шагом является многократное амплифицирование выбранных генетических фрагментов вируса с использованием термоциклеров. В реакционную смесь добавляют специфичные праймеры, которые комплементарны участкам генома SARS-CoV-2, дезоксинуклеотидтрифосфаты (dNTP), буфер, а также термостабильную ДНК-полимеразу. Циклический процесс включает три основных этапа: денатурация, отжиг праймеров и элонгация, в результате чего концентрация целевого фрагмента экспоненциально возрастает.
В современных системах используется технология реального времени (qPCR), позволяющая одновременно проводить амплификацию и количественно оценивать количество вирусной ДНК с помощью флуоресцентных зондов. В процессе реакции зонд, метка которого испускает свет, связывается с амплифицированным фрагментом. Интенсивность флуоресценции прямо пропорциональна количеству вирусного генетического материала в образце. Это позволяет не только установить факт присутствия вируса, но и оценить вирусную нагрузку, что важно для определения стадии заболевания и эффективности лечения.
Полученные данные анализируются с помощью специализированного программного обеспечения, которое сравнивает пороговые значения флуоресценции с установленными нормативами. Если амплификация целевого гена обнаруживается в течение определённого числа циклов (пороговое значение Ct), тест считается положительным, что подтверждает наличие инфекции COVID-19. Если амплификация отсутствует или Ct значительно превышает норму, результат интерпретируется как отрицательный.
ПЦР-диагностика COVID-19 обладает высокой чувствительностью и специфичностью, что делает её золотым стандартом для подтверждения диагноза. Однако успех теста во многом зависит от качества образца и своевременности его обработки. Именно поэтому правильный сбор материала, соблюдение стандартов транспортировки и экстракции РНК являются ключевыми этапами, гарантирующими достоверность результатов.
Методика применяется как для диагностики острой инфекции, так и для массового скрининга населения, особенно в условиях пандемии. Благодаря автоматизации процессов и высокоточным реактивам, результаты обычно доступны в течение нескольких часов, что позволяет оперативно начинать лечение и принимать меры по изоляции инфицированных лиц. Таким образом, ПЦР-диагностика COVID-19 является важным инструментом в борьбе с распространением вируса, позволяя быстро и точно выявлять случаи заболевания, контролировать эпидемиологическую ситуацию и принимать своевременные меры для защиты общественного здоровья.
Данная статья носит информационный характер
